SARS-CoV-2 nukleinsyratestsats

Avsedd användning:

SARS-CoV-2 nukleinsyratestkit används för kvalitativ detektering av nukleinsyra från covid-19 i nasofaryngeala pinnprover, orofaryngeala pinnprover och sputum. Testresultaten ger molekylär diagnos som grund för infektion eller misstänkta patienter och bör inte användas som det enda kriteriet för klinisk diagnos.

Material:

Test procedur:

A. Provberedning

Extraherat RNA är utgångsmaterialet för SARS-CoV-2 nukleinsyratestkit.

Viktigt: Varje nukleinsyraextraktionsprocedur måste utföras samtidigt med en positiv kontroll (40 μL, späd med steril koksaltlösning/PBS till önskad volym) och en negativ kontroll (40 μL, späd med steril saltlösning/PBS till önskad volym).

Det rekommenderas att använda följande kommersiella nukleinsyraextraktionssatser: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viralt RNA Mini-kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Inställning av reaktionsblandning

1. Alla reagenser och prover ska tinas helt, blandas helt och centrifugeras kort vid rumstemperatur (ungefärligt intervall 18 till 25 grader) före användning.

2. Förbered den erforderliga volymen av reaktionsblandningen i ett mikrocentrifugrör av lämplig storlek av polypropen.

3. Pipettera 25 µL av reaktionsblandningen i varje erforderlig brunn i en lämplig optisk 96-brunnsreaktionsplatta eller ett lämpligt optiskt reaktionsrör.

C. Malltillägg

1. Tillsätt 5 μL extraherat RNA från prover/positiv kontroll/negativ kontroll. Den totala volymen är 30 μL.

2. Blanda proverna och kontrollerna noggrant med reaktionsblandningen genom att pipettera upp och ner/Vortexa.

3. Stäng 96-brunnens reaktionsplatta med lämpliga lock eller optisk självhäftande film och reaktionsrören med lämpliga lock.

4. Centrifugera 96-brunnens reaktionsplatta i en centrifug med en mikrotiterplattorotor i 30 sekunder vid ungefär 2500 rpm.

D. Programmering av realtids-PCR-instrumentet

För grundläggande information om inställningar och programmering av de olika realtids-PCR-instrumenten, se användarmanualen för respektive instrument. Analysen har optimerats för ABI7500 Real-Time PCR-systemet. PCR-körningen utförs med cykelförhållanden som beskrivs i tabellen nedan.

Definiera fluorescensdetektorerna

*Ställ in instrumentets fluorescens interna referens till "Ingen", till exempel: För ABI-seriens instrument ställ in "Passiv referens" till "Ingen".

E. Dataanalys

Ställ in analysparametrarna och analysera data enligt bruksanvisningen för de relevanta instrumenten.

Ta ABI 7500 som ett exempel:

Baslinjen bör ställas in på ett område som eliminerar bakgrundsfluorescensen som finns i de tidiga amplifieringscyklerna, men som inte överlappar området där förstärkningssignalerna stiger över bakgrunden (Startvärde:3~10; Slutvärde: {{2} }). Cykeltröskeln (Ct) bör vara i basen av den exponentiella fasen. Klicka på "Analysis" för att få analysresultatet automatiskt och läs detekteringsresultatet i "Rapport"-fönstret.

Populära Taggar: sars - cov-2 nuklein syra testa kit, Kina, leverantörer, tillverkare, fabrik, bulk